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人elisa试剂盒的加样与稀释
点击次数:142 发布时间:2018-03-02
   人elisa试剂盒的加样与稀释
  人elisa试剂盒也称为酶联免疫试剂盒,是酶免疫测定技术中应用zui广的技术。人elisa试剂盒其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的elisa酶联免疫吸附试验有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后者用于测定特异抗体。
  人elisa试剂盒在使用酶免试剂盒前准备的标本也有具体要求:标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。取材前须请阅读说明书。
  人elisa试剂盒样品采集:收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。
  人elisa试剂盒规范品的稀释与加样:
  1.人elisa试剂盒在酶标包被板上设规范品孔10孔,在榜首、第二孔中别离加规范品100μl,然后在榜首、第二孔中加规范品稀释液50μl,混匀;然后从榜首孔、第二孔中各取100μl别离加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔别离加规范品稀释液50μl,人elisa试剂盒混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl别离加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中别离加规范品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl别离加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中别离加规范品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中别离取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔别离加规范品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度别离为30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。
  2. 加样:人elisa试剂盒别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,人elisa试剂盒然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
  3. 温育:人elisa试剂盒用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  4. 配液:将20倍浓缩洗刷液用蒸馏水20倍稀释后备用。
  5. 洗刷:当心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6. 加酶:人elisa试剂盒每孔参加酶标试剂50μl,空白孔在外。
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